Strumento di analisi dei frammenti

Per estrarre una miscela di frammenti di DNA, mettere attraverso uno strumento PCR per fare una semplice purificazione. Rimuovere il singolo nucleotide DDNTP fluorescente gratuito, lasciando un frammento di DNA di una certa lunghezza, che può essere sequenziata sulla macchina. Una soluzione di poliacrilammide viene prima iniettata in un capillare cavo durante il processo di sequenziamento. Quindi, la soluzione di poliacrilammide è stata ionizzata dall'irradiazione della luce UV per generare una reazione di polimerizzazione. Il gel di poliacrilammide produce un effetto di separazione sotto il campo elettrico per avviare l'elettroforesi del nucleotide. Il movimento elettroforetico di corti frammenti di DNA è veloce e il movimento elettroforetico di lunghi frammenti di DNA è lento. La miscela di frammenti di DNA si sposta da una carica negativa a una carica positiva sotto l'azione di un campo elettrico in un capillare contenente un gel di poliacrilammide. L'estremità positiva del capillare è irradiata con un laser a stato solido e un sensore ottico spettroscopico registra le diverse intensità di fluorescenza. Ogni frammento di DNA, quando si passa attraverso il punto di scansione laser, ha un gruppo fluorescente, che emetterà un colore fluorescente specifico.

Perché nel precedente processo di reazione di polimerizzazione, il punto di partenza della reazione di polimerizzazione inizia da una posizione di primer specifica. Pertanto, il frammento di DNA che raggiunge prima il punto di scansione laser dell'elettroforesi è il frammento più corto, quindi la sua posizione di terminazione della polimerizzazione sarà più vicina alla posizione di avvio della polimerizzazione. Pertanto, il colore fluorescente riflette quale delle basi all'estremità 3 'è A, T, C e G.

Al contrario, più lenta l'elettroforesi dei frammenti di DNA raggiunge il punto di scansione laser, più a lungo i frammenti di DNA. Di conseguenza, il suo sito di terminazione è più lontano dalla posizione di partenza del primer. Infine, si ottiene una mappa di quattro colori.