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Nanjing Superyears Gene Technology Co., Ltd. [Jiangsu,China] Attività di tipo:fabbricante , Servizio , Società commerciale I mercati principali: Africa , Asia , Europa dell'est , Europa , Medio Oriente , Nord Europa , Europa occidentale , In tutto il mondo esportatore:41% - 50% Karts:ISO13485, ISO14001, ISO9001, CE, MSDS, FSC, CCC, EMC, Test Report

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L'uso di un termociclatore a 5 canali PCR in tempo reale PCR PCR

2023-07-17

Real Time Pcr

L'utilizzo di una PCR PCR in tempo reale a 5 canali PCR PCR prevede i seguenti passaggi:

1. Preparazione del campione: estrarre DNA o RNA dal campione biologico di interesse. Questo può essere fatto utilizzando vari metodi come l'estrazione di fenolo-cloroformio, la purificazione a base di colonne o la purificazione a base di perline magnetiche.
2. Progettazione di primer e sonda: primer e sonde specifici per progettare che si legaranno alla sequenza target di interesse. Questi primer e sonde sono in genere progettati utilizzando strumenti software che considerano fattori come la temperatura di fusione, il contenuto di GC e la specificità.
3. Impostazione della reazione PCR: preparare il mix di reazione PCR combinando il DNA o il modello di RNA, i primer, le sonde e altri componenti necessari come nucleotidi, tampone e polimerasi. La miscela di reazione viene quindi distribuita nei pozzi della piastra PCR.
4. Termociclaggio: posizionare la piastra PCR nel termociclatore a 5 canali, che può ospitare più campioni contemporaneamente. Il termociclatore passerà quindi attraverso una serie di cicli di temperatura, tra cui denaturazione, ricottura ed estensione, per amplificare la sequenza di DNA o RNA target.
5. Monitoraggio in tempo reale: il termociclatore a 5 canali è dotato di capacità di rilevamento della fluorescenza. Durante ciascun ciclo di temperatura, il termociclatore rileva la fluorescenza emessa dalla sonda etichettata mentre si lega al DNA amplificato o all'RNA. Ciò consente il monitoraggio in tempo reale del processo di amplificazione.
6. Analisi dei dati: i dati di fluorescenza in tempo reale vengono raccolti e analizzati utilizzando software specializzato. Il software calcola il valore della soglia del ciclo (CT), che rappresenta il numero di ciclo in cui il segnale di fluorescenza attraversa una soglia predefinita. Il valore CT viene utilizzato per quantificare la quantità iniziale di DNA o RNA target nel campione.
7. Interpretazione dei dati: i valori CT ottenuti dal termociclatore a 5 canali possono essere confrontati tra campioni diversi o condizioni sperimentali. Ciò consente la quantificazione dei livelli di espressione genica, il rilevamento di mutazioni specifiche o le variazioni genetiche o la misurazione della carica virale, tra le altre applicazioni.
Nel complesso, la PCR di QPCR in tempo reale del termociclatore a 5 canali PCR è un potente strumento per varie applicazioni di biologia molecolare, fornendo una quantificazione rapida e accurata degli acidi nucleici.

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